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抑菌實(shí)驗(yàn)

更新時(shí)間:2019-03-01  |  點(diǎn)擊率:2476

一、 菌種

(一)、細(xì)菌:大腸桿菌(Escherichia coli)、枯草桿菌(Bacillus subtilis) 和金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus);

(二)、真菌:啤酒酵母(Saccgaromyces cerevisiae)、米曲霉(Aspergillus  oryzae)3402、黑曲霉(Aspergillus  niger)、葉點(diǎn)霉(Phyllosticta maydis )和刺盤(pán)孢霉(Colletotrichum musae)

二、 培養(yǎng)基

(一) 細(xì)菌培養(yǎng)液:LB

液體:胰蛋白胨10.0g  酵母提取物5.0g NaCl 10.0g10mol/LNaOH 100μL 蒸餾水定溶至1.0L    pH 7.0~7.4 如要配置固體LB培養(yǎng)基,加15.0g瓊脂糖/L

(二)、真菌培養(yǎng)液:馬鈴薯培養(yǎng)基(PDA) 馬鈴薯(去皮切塊) 200.0g 葡萄糖 20.0g 瓊脂  18.0g, 蒸餾水                1000mL pH 自然

三、    器材

培養(yǎng)皿(90mm)、濾紙、三角耙、接種環(huán)、試管

四、 實(shí)驗(yàn)步驟

(一)、抑菌圈的測(cè)定(濾紙片法)

1、菌種接種  將保存菌種反復(fù)轉(zhuǎn)種2次,使菌種新鮮,細(xì)菌置30℃,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)1d,霉菌置27℃,恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)3d,備抗菌實(shí)驗(yàn)用

2、菌懸液制備  在超凈臺(tái)里將轉(zhuǎn)接后生長(zhǎng)良好的菌種試管斜面注入適量無(wú)菌水(約5mL),接種環(huán)輕刮菌落,搖晃,置旋渦混合器混勻。

3、倒平板  在超凈臺(tái)里將培養(yǎng)基倒入平板,每板約15mL左右,水平放置,凝固后倒置放入30℃恒溫培養(yǎng)箱中,2d后觀(guān)察是否有菌落生長(zhǎng),若沒(méi)有則可供下一步實(shí)驗(yàn)使用,否則需重新倒平板。

4、涂布在超凈臺(tái)里用槍取0.1ml菌懸液注入平板,放置5min左右后用三角耙涂布均勻,每種菌設(shè)置兩個(gè)重復(fù)平板。

5、貼片在超凈臺(tái)里將平板平均分為6個(gè)區(qū),對(duì)角設(shè)置平行組,同時(shí)用無(wú)菌水做對(duì)照組,硫酸鏈霉素(10U)作陽(yáng)性對(duì)照。每?jī)蓮垶V紙片(直徑1.1cm或0.6cm)為一貼,用鑷子夾著濾紙片在樣品中輕輕蘸一下后,取出貼在平板的位置,輕摁一下使濾紙片牢固,置(正放)4℃冰箱中放24h。

6、培養(yǎng)24h后放入(倒置)恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng),細(xì)菌30℃,霉菌27℃。細(xì)菌培養(yǎng)24h后觀(guān)察結(jié)果,霉菌72h后觀(guān)察結(jié)果。

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